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不同病理檢測樣本的固定要求

發布時間

2024-05-14

　　我們在實驗過程中，根據實驗目的，對所獲得的樣本進行病理檢測，樣本固定是最重要的一環，固定方法選擇不當會增加后續實驗難度，甚至造成后續實驗失敗，因此根據樣本種類和實驗目的選擇的方法尤為重要。那么今天就淺淺聊一下這方面的知識，希望對大家的實驗有所幫助。

　　一、組織樣本固定及運輸條件

　　1.常規病理檢測動物組織樣本，用10%中性福爾馬林固定液固定。

　　2.冰凍切片組織樣本，用OCT包埋，液氮速凍，-80℃液氮保存。

　　3.免疫組化和熒光組織樣本，用4%多聚甲醛固定液固定。

　　4.電鏡組織樣本，用2.5%戊二醛固定，4℃保存。

　　5.常規病理檢測植物組織樣本，用FAA(福爾馬林-醋酸-酒精)固定液固定。

　　6.特殊的組織樣本需用特殊固定液，比如眼球用Davidson固定液。

　　二、組織樣本固定過程中注意事項

　　1.動物解剖后固定有兩個基本原則：①組織離體后在30min內完成保存或固定;②固定液充足，固定液體積：組織體積=10：1。

　　2.將組織塊投入固定液之后可以用搖床幫助固定，使組織塊充分接觸固定液，勿使其粘附于瓶底或瓶壁。

　　3.固定用容器應根據樣本體積而定，不宜用V型底，細長管狀容器保存。

　　4.組織如覆有血液或污物等，固定前用生理鹽水洗去，以達到最佳的固定效果。

　　5.小動物腦垂體、主動脈、坐骨神經和眼球及其附屬腺等易丟失的臟器放在包埋盒或Eppendorf管等另行固定。

　　6.大組織樣本應切開固定，以免內部區域因固定不及時自溶腐敗。

　　7.胃、腸道的內容物處理時不能擠壓，防止破壞黏膜，可用注射器注射10%中性福爾馬林或者4%多聚甲醛進入組織進行預固定，等待30min左右后，使用PBS清洗內容物。

　　8.肺等有較大空腔的組織，選擇在固定液上放濕棉花團，防止組織漂浮在固定液上導致固定不充分。

　　三、細胞樣本固定及運輸條件

　　1.細胞爬片：爬片放入12或24孔板內，PBS清洗后4%多聚甲醛固定，-20℃保存，常溫運輸。

　　2.貼壁細胞：消化后，離心，保留細胞沉淀，PBS清洗，離心，保留細胞沉淀，4%多聚甲醛重懸，常溫運輸。

　　3.懸浮細胞：離心，保留細胞沉淀，PBS清洗，離心，保留細胞沉淀，4%多聚甲醛重懸，常溫運輸。

　　樣本種類和實驗目的多種多樣，根據實驗目的選擇適合的方法實驗就成功了一半。小伙伴們還有其他想了解的內容，可以后臺私信我們呦