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爍樸實(shí)驗(yàn)室疑難解答1
發(fā)布時(shí)間
2024-06-12
1、小鼠腦部組織切片用什么方式比較好？
網(wǎng)友：我想對腦部的核蛋白進(jìn)行免疫組化，想問一下，石蠟切片比較好，還是冰凍切片，一般固定采用什么方式，方便給一下具體操作步驟嗎？謝謝
回答：常規(guī)病理樣品采用10%中性福爾馬林進(jìn)行固定，免疫染色樣品可以用4%的多聚甲醛固定，以上兩種固定液體積應(yīng)超過組織體積10倍，看固定液狀態(tài)進(jìn)行更換；如果考慮做超微病理例如電鏡，可以用2.5%戊二醛進(jìn)行固定，電鏡樣品的固定要即時(shí)取材即時(shí)固定，同時(shí)取材要薄，小；如果是免疫組化的話，冰切和石蠟都沒有太大區(qū)別，免疫熒光的話推薦冰切。
2、肝臟染色
各位同學(xué)，我做的HE染色在顯微鏡下看組織都干的一列一列的，這是脫水過渡還是包埋沒包好啊？有沒有好的建議和方法？
回答：最好提供一下具體的染色圖，聽您的描述是組織在染色圖片中呈現(xiàn)出皸裂的狀態(tài)（這個(gè)干是指您看到了細(xì)胞固縮還是什么其余情況，我這邊就簡單描述下裂片可能產(chǎn)生的原因）
- 脫水過度，導(dǎo)致組織變硬，切片時(shí)會(huì)導(dǎo)致圖片成裂片狀態(tài)或脫片；
- 烤片階段，烘烤的溫度或者時(shí)間過高或過長，會(huì)導(dǎo)致組織裂片或脫落；
- 展片步驟，展片時(shí)間過長也會(huì)導(dǎo)致組織裂片；
- 固定不完全，部分內(nèi)部組織為固定透也會(huì)產(chǎn)生這樣的結(jié)果。
具體的情況還需要看整張片子的具體情況，如果時(shí)沒有固定透，切片圖中會(huì)出現(xiàn)迷糊和灰染的現(xiàn)象。
3、HE染色，如何觀察腫瘤血管生成？
將小鼠皮下成瘤的腫瘤組織進(jìn)行石蠟切片并進(jìn)行HE染色，請教各位如何通過HE染色判斷血管生成情況？血管成什么樣的形態(tài)？
回答：這個(gè)血管形成在HE中只能觀察一個(gè)大概，想要進(jìn)一步確認(rèn)和觀察建議使用免疫染色，可以使用血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、血管生成素抗體等。
4、HE染色封片后能重染嗎？
HE染色封片后發(fā)現(xiàn)顏色太淺，能夠把片子重新染色封片嗎？
回答：可以的，需要將片子放入分化液中分化，洗去染色后重新染色即可，不過染色時(shí)間會(huì)適當(dāng)縮短，鏡檢后再進(jìn)行封片。
5、做HE染色石蠟切片切的組織塊位置對結(jié)果有影響嗎？
回答：我理解為取材的組織位置，這個(gè)會(huì)對結(jié)果產(chǎn)生影響，以腎臟為例，包含的結(jié)構(gòu)有腎皮質(zhì)、腎乳頭、腎盂，腎動(dòng)脈、腎靜脈等，不同的取材位置甚至不同的切法（橫縱切），都會(huì)看到不同的組織或者相同組織的不同面。
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